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一竞技胃肠胶囊维持胚胎小白鼠胃组织器官型植块存活及增进细胞增殖
[摘要]：目的：通过体外检测一竞技胃肠胶囊（GIC）对胚胎小白鼠胃组织器官型植块生长的影响以探索GIC修复胃肠道粘膜损伤的机理。要领：体外作育胚胎小白鼠胃器官型植块，将植块分为两组：实验组和比照组。效果：实验组的胃器官型植块能很好地维持存活，从其中长出的单个细胞以及细胞克隆生长好、生长时间长。而比照组的胃器官型植块很快变性殒命。二者差别很是显著。结论：GIC能维持胚胎小白鼠胃器官型植块存活并增进来自植块的细胞和细胞克隆的生长，并且此历程可能与GIC激活上皮干细胞有关。
[要害词]：GIC ；胃植块 ；生长
GIC Could Maintain Survival and Promote Cell Growth of Organ-Type Explants of Stomach of Mouse Embryo Xu rong-xiang,Wang Yan-ping,Fan Ran,etc。
Central laboratory, MEBO Global Group 100053
[Abstract]： Objective: To research on the reparative mechanism of GIC on the lesion of gastrointestinal tract through testing the effect of GIC on survival and growth of organ-type explants of gastric tissue of mouse embryo. Methods: Cultured the organ-type explants of gastric tissue of mouse embryo in vitro, all the explants were divided into two groups: test group and control group. Results: Explants in test group could survive，single cells and cell clones from explants grew well and long. However, explants, cells and cell clones in control group died off after a short period of time. There was significant difference between two groups. Conclusion: MEBO could promote survival and growth of cells of gastric explants of mouse embryo and this process may be related to activation of epithelial stem cells.
[Key words]： GIC; gastric explant; growth
本实验的目的在于通过体外检测GIC对胚胎小白鼠胃组织器官型植块生长的影响以起源探讨GIC治疗粘膜损伤性疾病的机理。
一. 仪器、装备、质料、试剂及实验动物
超净事情台（北京半导体装备二厂）、
作育箱（美国Forma）、超等恒温水浴及恒温电烤箱（重庆四达）、冰箱（江苏长岭）、倒置显微镜（重庆光学仪器厂）、显微成像剖析系统（上�？迫穑⑽⒉ü愣獹alanz）、微型盘算机（北京沐泽）、光学显微镜（江苏光学仪器厂）、种种型号注射器、12孔作育板（丹麦NUNC）、50ml离心管、Eppendorf离心管、微量加样器（1000μl、200μl、20μl、10μl, 均为法国Gilson）、巨细滴头、作育皿（φ5cm、φ6cm）、0.22μm微孔滤膜、针头滤器、种种眼科手术器械、显微外科器械、有盖三角烧瓶、有盖小试管、针头、GIC（本公司生产）、MEM作育基（美国Hyclone）、胎牛血清（杭州三利）、青霉素和链霉素（华北制药）等。
实验动物：昆明种胚胎鼠。
二. 实验要领：
1．取一只孕16日龄的昆明种雌性小白鼠，颈椎脱臼法正法，先置于75%乙醇中浸洗一遍（2分钟），再置于75%乙醇中消毒5分钟 ；
2．用眼科剪以及止血钳先剪开雌鼠的腹部皮肤，钝性疏散至两侧，充分袒露腹壁肌肉，然后小心剪开腹壁全层，切勿伤及内脏及小鼠胚胎 ；
3．剪开子宫，从宫腔中取出胚胎鼠，置入无菌平皿中 ；
4．用双抗-冷PBS将胚胎鼠体表洗涤两次，每次1分钟 ；
5．用显微外科铰剪将胚胎鼠的腹壁剪开，再用显微外科镊子夹起鼠胃，自贲门及幽门部切断，获得全胃，切掉并弃去近贲门的1/3，然后沿胃大弯处纵行切开鼠胃，充分袒露胃粘膜 ；
6．用双抗-冷PBS将胚胎鼠胃一连洗涤两次，每次1分钟 ；
7．将鼠胃置于含双抗的MEM作育液中浸洗2次，每次１分钟 ；
8．将鼠胃剪成极小的器官型植块，面积约1mm×1mm ；
9．将植块置于12孔作育板的作育孔中央，每孔5块，距离约2mm，结构合理，粘膜面向上，轻轻按压每块植块，使其紧贴作育板的外貌 ；
10．沿作育孔的边沿，缓慢加入约0.5ml的完全MEM作育液，勿使作育液与植块接触 ；
11．将作育板置于37
、５％作育箱中预孵育1小时 ；
12．每孔加完全MEM作育液2ml，轻拿轻放，切勿使植块飘起，实验组加GIC ；
13． 实验组和比照组同步等量换液，每次去掉原液的1/2左右, 再加入相同量的新鲜MEM作育液 ；
14．用倒置显微镜视察植块生长情形，用显微成像纪录剖析系统纪录所视察的效果，并用盘算机生涯图像。
三．实验效果
细胞全程作育111天以内的报告：作育历程中未泛起污染，实验组和比照组的胃组织植块刚最先作育时，能牢靠在作育孔中央，但随着作育时间的延伸，植块先后逐步脱离作育孔底部，游离飘浮于作育液中，但仍然贴近作育孔底部，并且大多集中于作育孔中央，植块的巨细和形状险些没有转变。这是作育前7天的情形。
实验组植块和比照组植块在作育的前７天，组织块是完整的，但从作育的第8天最先，组织块就最先逐渐松解，并最终成为肉眼不易察觉的组织块，同时在实验组和比照组的视野中泛起了单个细胞以及细胞克隆，在体外作育的第１８天，比照组中的单个细胞以及细胞克隆逐渐变黑、皱缩、殒命、硬结，而此时实验组的细胞生长继续泛起优异的生长态势，单个细胞许多，在视野中随处可见，细胞类型大多为圆形或椭圆形，细胞核清晰，细胞是典范的活细胞，以作育孔中央数目最多，越靠近作育孔边沿细胞越少，边沿险些没有，同时细胞克隆数也逐渐增多，每个克隆所含有的细胞个数也越来越多。这种显着的差别在其它器官型植块的作育中也一经重复泛起过，主要与营养物质供应有关。颜色变深往往是组织细胞变性坏死的先兆，说明纯粹的MEM作育基无法提供应组织块合适而富足的营养，恰恰相反，GIC以其富厚的营养从一最先便能使组织处于一个与体内情形相差不大的生长情形中，充分包管了组织和细胞的活性。
下面为实验组和比照组的比照图，从中可以看到差别是何等之显着。
| 图1 作育第24天。图1A为比照组，图1B为实验组。比照组中的胃组织细胞或细胞克隆已经殒命，实验组中显示的是细胞克隆。 | |
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| 图2 作育第30天。图2A为比照组，图2B为实验组。比照组中残留的是胃组织细胞碎片，实验组中是一个细胞克隆。 | |
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| 图3 作育第38天，图3A为比照组，图3B为实验组。比照组中残留的是胃组织细胞碎片，实验组中是一个细胞克隆，克隆中的细胞生长优异。 | |
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| 图4 作育第42天，图4A为比照组，图4B为实验组。比照组中残留的是胃组织细胞碎片以及细胞克隆碎片，实验组中是细胞克隆。 | |
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